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Instruções para o exame: Prova Cruzada de Linfocitos T e B (Receptor)

Orientação

Exigência	Descrição
Materiais	Sangue Periférico e Soro
Conservantes	ACD
Volume Recomendável	1 tubo ACD de 8,5mL e 1 tubo de seco de 4mL ou 1 tubo seco com gel separador de 4mL
Tempo de Jejum	Jejum não obrigatório
Conservação	(Sangue)- Colher 8,5ml de sangue em um tubo com ACD (tampa amarela) - estável em temperatura ambiente por 72 horas. (Soro)- Colher 4 ml de sangue em um tubo seco ou 4mL em um tubo seco com gel separador - estável por 72 horas em temperatura ambiente. Quando separado e aliquotado em microtubo, o soro tem estabilidade indeterminada se congelado à -80°C.
Critérios de Rejeição	Amostras de sangue periférico congeladas. Presença de coágulo ou hemólise grosseira. Amostras coletadas em conservante inadequado.
Critérios de Restrição	Amostra com volume inferior ao solicitado. Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado. Amostra fora do prazo de viabilidade. Amostras sem a correta identificação. Amostras coletadas há mais de 72 horas que não estiverem estocadas adequadamente. Paciente que tiver recebido transfusão sanguínea no prazo inferior a 15 dias ou tiver recebido imunoglobulina no prazo inferior a 24 horas. Falta de requisição médica.
Observações	Para a realização deste exame é necessário amostra do doador que deve ser coletada preferencialmente junto com a coleta do receptor. É obrigatório o lançamento do exame Prova Cruzada de Linfocitos T e B (Doador) [LG010]. Justificativa: o exame prova cruzada receptor é um complemento da prova cruzada doador. Em caso de indisponibilidade de coleta no tubo ACD, pode ser utilizado alternativamente o tubo de heparina. Para a realização deste exame é necessário o preenchimento do questionário em anexo.
Última Atualização	25/09/2023
Documentos Obrigatórios	Formulário de Requisição Requisição Médica Termo de Consentimento

Metodologia

A metodologia usada no exame é Prova Cruzada por Citometria de Fluxo.

A Prova Cruzada é uma técnica utilizada para determinar a existência de anticorpos anti HLA no soro do receptor direcionados contra os antígenos HLA expressos na membrana da célula do doador e quando realizada pelo método de Citometria de Fluxo permite a detecção de baixos títulos de anticorpos circulantes no soro do receptor. A presença de anticorpos anti-HLA doador específico é um risco para o transplante e é responsável pelas rejeições humorais. Os linfócitos T e B do doador são separados por seleção negativa utilizando a técnica RosseteSep e separação por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque e cruzados com o soro do receptor. É adicionado o reagente anti-IgG que irá se ligar onde houver ligação antígeno-anticorpo e emitir fluorescência, também é adicionado anti-CD3 (linfócitos T) e anti-CD19 (linfócitos B) que se ligam nos linfócitos possibilitando a diferenciação dos linfócitos T e B. Esta reação é analisa pelo Citômetro de Fluxo que gera dados brutos que são interpretados pelo setor de Histocompatibilidade. A reação positiva indica a presença de anticorpo anti-HLA doador específico e recomenda-se a busca de um novo doador.