Instruções para o exame: PESQUISA DE MUTAÇÃO ESPECIFICA (GRAR) - SEM LAUDO

Exigência Descrição
Materiais
  • Sangue periférico

Conservantes
  • Tubo E2: EDTA
  • Tubo PAXgene: Aditivo para RNA
Volume Recomendável

4 ml por tubo

Tempo de Jejum

Jejum não obrigatório

Conservação
  • K2: Até 2 dias refrigerado entre 2 e 8 °C
  • PAXgene: 1 dia a temperatura ambiente e depois armazenar a -80 °C.

Critérios de Rejeição
  • Tubo inadequado
  • Amostra congelada
  • Amostra não cadastrada.
  • Amostra sem etiqueta.
  • Amostra sem TCLE do participante preenchido e assinado.
  • Amostras sem nome do participante.
  • Amostra sem número de cadastro.
Orientações para envio de amostras DNA: Coletar 2 tubos E2 de 4 ml de sangue.

RNA: Coletar 1 tubo PAXgene de 4 ml de sangue.

Documentos Obrigatórios
  • Termo de Consentimento

Metodologia

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Nextera ou sequenciamento bidirecional por Sanger.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). O sequenciamento da região de interesse pode ser realizado utilizando a tecnologia de PCR seguido por Nextera ou através de PCR seguido por Sanger. Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada uma nova biblioteca de Nextera ou Sanger. O sequenciamento de segunda geração é realizado na plataforma Illumina e o sequenciamento de Sanger é realizado em um sequenciador automático ABI 3500. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente utilizado NGS ou sequenciamento bidirecional em Sanger. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19.

Limitações do exame

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas, mitocondriais ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

Para coleta de exames, é obrigatória a apresentação de documento original oficial com foto, de acordo com a resolução RDC/ANVISA N° 302.

Informamos que a validade das informações dessa mensagem é de 5 (cinco) dias úteis após sua geração. Para mais informações ou dúvidas, estamos sempre à disposição em nossos canais de atendimento abaixo ou via e-mail pelo atendimentogenomika@einstein.br.