Instruções para o exame: PESQUISA DE VÍRUS DE RNA E GENOTIPAGEM

Exigência Descrição
Materiais
  • Sangue (Plasma)
  • ou
  • Swab (Secreções Nasofaríngea e Orofaríngea)
  • ou
  • Lavado Brônquico
Conservantes
  • Tubo com Gel para Sangue
  • Swab em frasco estéril para Secreções Nasal e Orofaríngea
  • Tubo estéril para Lavado Brônquico
Volume Recomendável
  • Sangue  (2,0 a 4,9 ml)
  • Swab (2,0 a 10,0 ml)
  • Labado Brônquico (5,0 a 10,0 ml)
Tempo de Jejum
  • Preferencialmente: 30 minutos em caso de coleta de amostra orofaríngea.
Conservação
  • 24 horas Refrigerado (2ºC à 8ºC)
  • 5 Dias Congelado (-10°C a -30°C)
Critérios de Rejeição
  • Conservante inadequado
  • Amostras de sangue com hemólise
  • Acondicionamento incorreto das amostras
  • Amostras de sangue coletadas sem gel separador
  • Amostras sem identificação
Orientações para envio de amostras

Colher de maneira estéril, não abrir o tubo de coleta. Quando a coleta se realiza em conjunto com a coleta de amostras para outros exames, utilizar sempre último tubo. Centrifugar o tubo para separação do plasma o mais rápido possível (máximo até 2 horas após a coleta).

Para separação de plasma centrifugar conforme as seguintes orientações:

EDTA-K2 com GEL separador: 3500 rpm por 15 minutos;

ATENÇÃO: A etapa de centrifugação é muito importante para qualidade dos resultados. A amostra não deve ser recentrifugada, mesmo que a separação tenha sido aparentemente insuficiente.

A coleta de Lavado Brônquico - Orientações de Coleta:

Coletar 02 frascos de Lavado broncoalveolar.

NOTA: Este procedimento deverá ser realizado por médico, enfermeiro ou fisioterapeuta.

- Orientar o acompanhante do paciente quanto ao procedimento a ser realizado.

- Aspirar o material em tubo de Luck.

- Identificar o material e enviá-lo em tubo primário para o Laboratório.

A coleta de Swab:

- Colocar a máscara N95 e o óculos de proteção, antes de entrar na sala;

- Orientar o paciente ou o acompanhante quanto ao procedimento a ser realizado;

- Higienizar as mãos e calçar as luvas de procedimento;

NASOFARINGE

- Introduzir delicadamente o swab de rayon ou FLOQ em uma das narinas até encontrar resistência na parede posterior da nasofaringe realizando movimentos rotatórios;

- Repetir o procedimento na outra narina, com outro swab de rayon ou FLOQswab;

OROFARINGE

- Utilizar o abaixador de língua para expor bem a região de onde será colhido o material;

- Posicionar o foco de luz;

- Introduzir o swab de rayon ou FLOQswab na cavidade oral até tocar na região posterior da faringe e tonsilas, evitando tocar a língua;

- Após a coleta, introduzir as 03 amostras em um tubo da coleta estéril contendo salina 2 ml de salina;

- Fazer a identificação do frasco;

- Encaminhar a amostra para área técnica refrigerada;

- Não manipular os tubos após a coleta.

Documentos Obrigatórios

Metodologia

A metodologia usada no exame é Sequenciamento de Nova Geração (NGS).

O teste identifica o material genético de uma patógeno viral por técnicas de sequenciamento de nova geração sem a utilização de primers específicos. Na prática, isto significa que o RNA (cDNA) de todos os organismos em uma amostra serão sequenciados. Em seguida, os dados de sequenciamento gerados são analisados e comparados com bancos de dados públicos de genomas virais por ferramentas de bioinformática para a identificação e confirmação do patógeno viral. A identificação das sequências de um determinado patógeno viral após as etapas de confirmação é precisa e inequívoca, descartada a presença de contaminantes. Vale ressaltar que a técnica foi validada somente para vírus com o genoma de RNA.

Limitações do exame

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas, mitocondriais ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

Para coleta de exames, é obrigatória a apresentação de documento original oficial com foto, de acordo com a resolução RDC/ANVISA N° 302.

Informamos que a validade das informações dessa mensagem é de 5 (cinco) dias úteis após sua geração. Para mais informações ou dúvidas, estamos sempre à disposição em nossos canais de atendimento abaixo ou via e-mail pelo atendimentogenomika@einstein.br.