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Instruções para o exame: Análise de Quimerismo em 2 Subpopulações

Exigência	Descrição
Materiais	Sangue Medula Óssea Swab bucal (quando necessário)
Conservantes	EDTA ACD Swab estéril para coleta de amostras de DNA em tubo sem conservantes
Volume Recomendável	3 tubos EDTA de 4ml (aproximadamente 15 ml) e 1 tubo ACD de 8,5mL de sangue periférico ou de medula óssea (conforme solicitação médica) Swab: enviar em tubo sem conservantes Para pacientes pediátricos, será aceito o valor mínimo de 6 ml em tubo EDTA.
Tempo de Jejum	Jejum não obrigatório
Orientação	Para a realização deste exame é necessário amostra pré transplante(pode ser sangue periférico em EDTA caso seja coletada antes da data do transplante ou swab bucal como alternativa após a data do transplante) e amostra de sangue periférico do doador. As amostras pré transplante e do doador devem ser coletadas apenas na primeira vez que o paciente realizar o exame. A coleta deste exame é realizada de segunda a quarta-feira de 8h às 10h, devido a viabilidade celular. (Swab bucal)- É recomendado não beber café, não comer, fumar, mascar chicletes ou escovar os dentes 30 minutos antes da coleta. Qualquer tipo de protetor bucal (batom ou manteiga de cacau) deve ser removido. A coleta do material deve ser realizada obrigatoriamente com luvas durante todo processo de modo que não haja nenhum contato com o material. Realizar o esfregaço do swab por 90 segundos em cada lado da mucosa bucal e colocar imediatamente em um frasco seco, esteríl e vedar. Ter cuidado ao realizar o esfregaço para não causar ferimentos e contaminar o swab com sangue.
Conservação	(Sangue)- Colher 15 ml de sangue ou medula óssea em um tubo com EDTA (tampa roxa) e 8 ml de sangue ou 5 ml medula óssea em tubo com ACD (tampa amarela) - estável por 24 horas em temperatura ambiente. (Swab)- O material é estável por 7 dias em temperatura ambiente ou 15 dias em temperatura refrigerada.
Critérios de Rejeição	Amostra congelada. Presença de coágulo ou hemólise acentuada. Amostras coletadas em conservante inadequado. Quantidade de amostra insuficiente. Swab com sinais de contaminação com sangue. Amostras com Linfometria inferior à 1000cel/uL e Granulometria inferior à 1000cel/uL.
Critérios de Restrição	Amostra com volume inferior ao solicitado. Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado. Amostra fora do prazo de viabilidade Amostras sem a correta identificação. Falta de requisição médica.
Última Atualização	21/12/2023
Documentos Obrigatórios	Formulário de Requisição Requisição Médica Termo de Consentimento

Metodologia

A metodologia usada no exame é PCR-STR.

O DNA é extraído de sangue periférico, subpopulações celulares ou swab bucal de forma automatizada (QIASymphony). A porcentagem de Quimerismo é aferida pela análise de microssatélites: PCR-STR (Polymerase Chain Reaction – Short Tandem Repeats) que é baseada na amplificação de regiões STR de diferentes genes. Após a amplificação os fragmentos passam por sequenciamento automático (Sanger) e estes dados são analisados em um software onde é comparado o perfil pré transplante, perfil do doador e perfil pós transplante do paciente e gerado o resultado com informações precisas e precoces para a intervenção clínica.

Limitações do exame

A técnica de PCR-STR tem limite de detecção de 2% de quimera.